《草原主要毒害草发生规律与防控技术研究》 2016年12月工作简报 - 科研动态 - 西部草原毒害草研究中心

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《草原主要毒害草发生规律与防控技术研究》 2016年12月工作简报

公益性行业(农业)科研专项
《草原主要毒害草发生规律与防控技术研究》
201612月工作简报

根据《公益性行业(农业)科研专项《草原主要毒害草发生规律与防控技术研究》项目任务书安排要求,2016年12月份做了如下工作:
(1)醉马芨芨草毒性试验
本月主要进行醉马芨芨草亚慢性毒性试验第十至十三周的工作。采集血液及血清样本送检并对高剂量组小鼠进行4%多聚甲醛心脏灌注后采取内脏组织样本送出做组织切片和透射电镜。检测结果:(1)体重变化趋于稳定并小幅波动;(2)血清生化指标中ALP、ALP、AST、BUN试验组与对照组相比均有不同程度的升高,GLO、GLU、TG、TP试验组与对照组相比降低;(3)血液学指标中血液学指标中WBC、淋巴细胞、试验组与对照组相比降低,淋巴细胞比例升高;(4)脏器系数中除了脾减小外其余脏器系数都有不同程度的升高。
(2)人源和大鼠源细胞系的扩大培养和保种及相关细胞实验
本月主要进行人源和大鼠源细胞系的扩大培养和保种工作,并测定了多柔比星对大鼠心肌细胞H9c2(2-1)的IC50。(1)从中国科学院细胞库和武汉博士德生物工程有限公司购买了8种细胞系,其中人源细胞系包括三种卵巢癌细胞系(A2780、HO-8910和SK-OV-3)、三种膀胱癌细胞系(5637、T24和UM-UC-3)和一种正常细胞系(输尿管上皮细胞SV-HUC-1),大鼠源细胞系为大鼠心肌细胞H9c2(2-1)。将购买的以上细胞系进行扩大培养,之后冻存。(2)将大鼠心肌细胞H9c2(2-1)接种入96孔板,37 °C5% CO2条件下培养24 h,分别用不同浓度的多柔比星处理细胞12 h、24 h、48 h和72 h,弃去培养液,每孔加入100 μL CCK-8工作液(CCK-8试剂:细胞培养液=1:10),37 °C孵育2 h,检测450 nm处的吸光度,统计细胞抑制率,计算不同时间的IC50。结果:①已冻存细胞140管;②多柔比星对大鼠心肌细胞H9c2(2-1)的IC50正在统计。
(3)内生真菌Undifilum oxytropis的发酵培养及相关分子实验
本月主要进行了内生真菌Undifilum oxytropis的发酵培养、pCB1003质粒的扩增和内生真菌Undifilum oxytropis总DNA的提取。本月发酵培养的内生真菌大部分生长良好,将用于后续原生质体的制备;pCB1003由内蒙古师范大学卢萍老师赠送,本月将其扩增保存,用于后续实验潮霉素抗性基因的获取;采用真菌DNA提取试剂盒提取内生真菌Undifilum oxytropis总DNA,放置在4℃冰箱保存,用于后续PCR的模版,以便后续实验顺利进行。
(4)苦豆子相关细胞毒性试验
本月主要进行了槐定碱、苦豆碱、苦参素IC50的测定以及β-actin、目的蛋白P38以及P-P38的表达。将BRL 3A细胞接种于6.0皿,37℃5%CO2培养24 h,用1.0 mg/kg、1.5 mg/kg以及2 mg/kg的苦参碱处理细胞24 h,提取蛋白,采用Western Blot 进行β-actin、目的蛋白P38以及P-P38的表达,每孔上样量为20 μg,通过调整转膜时间60V 40min和改善洗涤条件,将之前采用的TBST洗3次,10 min/次改为TBST洗6次,5 min/次,背景偏高情况有所改善,结果较为理想。
(5)9种有毒植物生物碱提取及化学成分预实验
本月采用工业酒精热回流法提取碎米蕨叶马先蒿和毛序棘豆总生物碱,其中毛序棘豆提取粗浸膏20.5 g,提取率为10.3%。参照《天然药物化学实验》中介绍的植物化学成分预实验方法,进行瑞香狼毒、茎直黄芪、斑唇马先蒿、箭叶橐吾、黄花棘豆、从生黄芪、头花马先蒿、碎米蕨叶马先蒿和毛序棘豆化学成分分析。碎米蕨叶马先蒿预实验结果表明,乙醇提取液中,香豆素与萜类内酯检测为阳性,强心苷类检测为阴性;水提液中,皂苷和有机酸检测为阳性;鞣质和氨基酸、肽和蛋白质类为阴性。毛序棘豆预实验结果表明,石油醚提取液中,甾体、三萜类、挥发油检测为阳性;乙醇提取液中,酚类、黄酮、蒽醌类、有机酸、生物碱为阳性;水提液中,蛋白质、氨基酸、肽、鞣质为阴性,皂苷为阳性。
(6)完成《天然草原牲畜毒害草中毒防治技术》著作编写工作
根据《草原主要毒害草发生规律与防控技术研究》科研专项项目组连续五年对我国天然草原毒草种属分布与危害考察所获得的基本数据,筛选出对我国草地畜牧业危害严重的42种常见毒害草进行编写。第1-4章主要介绍中国草原毒害草概况、草原毒害草中毒概况、草原毒害草野外调查和草原毒害草资源综合利用,第5章主要介绍42种我国天然草原牲畜常见毒害草中毒防治技术,包括每种毒害草的形态特征、地理分布、生境、毒性部位、有毒成分、中毒原因、中毒症状、诊断、治疗和预防等方面内容。
   (7) 完成醉马芨芨草有毒生物碱降解实验样品生物碱及营养成分变化指标的检测 
    检测指标主要包括麦角酰胺、麦角新碱、干物质、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸性洗涤木质素和钙10个指标。并进行数据处理与分析,为综合评价不同处理方法对醉马草降解效果提供基础。
(8) 项目全面总结
全面对项目执行期2012年-2016年的经费使用情况进行整理,总结5年的财务支出情况,撰写财务收支情况执行报告和财务验收审计报告,为项目结题做准备。继续总结与完善项目执行期内的研究任务与成果,撰写项目业务验收报告和执行报告。

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