《草原主要毒害草发生规律与防控技术研究》 2016年11月工作简报 - 科研动态 - 西部草原毒害草研究中心

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《草原主要毒害草发生规律与防控技术研究》 2016年11月工作简报

公益性行业(农业)科研专项
《草原主要毒害草发生规律与防控技术研究》
201611月工作总结

根据《公益性行业(农业)科研专项《草原主要毒害草发生规律与防控技术研究》项目任务书安排要求,2016年11月份做了如下工作:
(1)醉马芨芨草毒性试验
本月主要进行醉马芨芨草亚慢性毒性试验第六至九周的工作。对实验小鼠进行第二、三次采样,计算每份样品的心、肝、脾、肺、肾、大脑、小脑的质量及其脏器系数,并且对血清生化指标进行检测(包括:ALB、ALP、ALT、AST、BUN、Ca、CRE、GLO、GLU、TG、TP)。结论:(1)体重变化趋于稳定并小幅波动;(2)血清生化指标中,ALP在第三次检测中高剂量组与对照组相比升高极显著,ALT升高显著,AST、BUN第二次和第三次检测中高剂量组低剂量组与对照组相比均有显著升高,GLO、GLU、TG、TP试验组与对照组相比降低,在第二次检测中呈显著性,白球比试验组与对照组相比升高,在第二次检测中呈显著性;(3)血液学指标中WBC、淋巴细胞、试验组与对照组相比降低,在第二次和第三次检测中呈显著性,中性粒细胞比例降低,在第二次检测中呈显著性,淋巴细胞比例升高,在第二次检测中呈显著性;(4)脏器系数中除了脾减小外其余脏器系数都有不同程度的升高。
(2)完成2016年度天然草地主要毒害草GPS标记点汇总工作
2016年度,课题组主要对内蒙古阿拉善、西藏藏北和林芝地区、新疆巴音郭楞蒙古自治州、青海玉树地区和甘肃天祝5省15个地区毒害草进行了实地调查和GPS精确标记。与2015年度相比,今年共新增毒害草GPS标记点664个,其中新疆新增69个,主要分布在博湖县、轮台县、库车县和和静县,其优势毒害草主要有小花棘豆、苦豆子和马先蒿等;西藏新增224个,主要分布在当雄县、墨竹工卡县、米林县和林芝县,其优势毒害草主要有茎直黄芪、瑞香狼毒、藏橐吾、甘肃棘豆、毛瓣棘豆和白花黄芪等;青海新增342个,主要分布在共和县、玛多县、玉树县、称多县和门源县,其优势毒害草主要有醉马芨芨草、甘肃棘豆、瑞香狼毒、茎直黄芪、镰形棘豆、黄帚橐吾、马先蒿、翠雀和大戟等;甘肃新增23个,主要分布在天祝藏族自治县,其优势毒害草主要有甘肃棘豆、瑞香狼毒和马先蒿等;内蒙古新增6个,主要分布在阿拉善左旗,其优势毒草主要有牛心朴子、变异黄芪和苦豆子等。其中,新增地区1个(新疆博湖县),新增有毒植物种类2种(位于西藏米林县的白花黄芪和青海共和县的大戟)。
(3)内生真菌Undifilum oxytropis培养条件优化
本月主要工作是内生真菌Undifilum oxytropis的复苏以及扩大培养,并挑选生长良好的内生真菌送至西北农林科技大学资源环境学院来航线副教授实验室,进行内生真菌Undifilum oxytropis培养条件的优化,包括培养基类型选择、培养基配比、培养最适温度、转速、发酵液pH等,确定最佳培养条件以及发酵条件,以便更好地应用于后期试验。
(4)苦豆子总生物碱提取及相关细胞毒性试验
将BRL 3A细胞接种于6.0皿,37℃5%CO2培养24 h,用1.0 mg/kg、1.5 mg/kg以及2 mg/kg的苦参碱处理细胞24 h,提取蛋白,采用Western Blot 进行β-actin和目的蛋白P38表达优化实验,上样量为30 μg,结果显示背景偏高,改善洗涤条件,将之前采用的TBST洗3次,10 min/次改为TBST洗6次,5 min/次,背景偏高情况有所改善。
(5)西藏昌都地区9种有毒植物营养成分分析及矿质元素测定
本月在西北农林科技大学生命科学院实验室,对采自西藏昌都天然草地的9种有毒植物瑞香狼毒、茎直黄芪、斑唇马先蒿、橐吾、黄花棘豆、从生黄芪、毛序棘豆、碎米蕨叶马先蒿和马先蒿中营养成分及矿物质元素进行测定。其中营养成分检测项目主要包括:粗纤维、粗蛋白、粗脂肪、灰分、酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维;矿质元素检测项目主要包括:铜、镁、钾、磷、锌、铁、钙、锰。目前,检测工作已经结束,正在进行实验数据整理工作。
(6)2种有毒植物化学成分的预实验
本月参照《天然药物化学实验》中介绍的植物化学成分预实验方法,对碎米蕨叶马先蒿和毛序棘豆化学成分进行分析。取植物粉末250 g,加石油醚60℃热回流3 h,过滤,旋转蒸发部分石油醚后,剩余部分放在表面皿上挥发,残留物进行萜类、甾体、挥发油与油脂等成分的检查。将乙醇提取物残留物进行挥干,加入250 mL蒸馏水,室温浸泡过夜。滤液供苷类、有机酸、酚类、鞣质、氨基酸、多肽、蛋白质、生物碱等成分检查。将残留样品中石油醚挥干,加入250 mL工业酒精,70℃热回流1.5 h。滤液进行酚类、鞣质、有机酸等成分检查。滤液减压回收,浸膏部分放入蒸发皿,加5%盐酸研溶,分取酸液进行生物碱的预实验。残留浸膏分成两部分,一部分用少量乙醇溶解,作黄酮、蒽醌、苷等成分的检查。另一部分溶于少量乙酸乙酯,加5%NaOH振摇,取乙酸乙酯层,蒸馏水洗掉碱性,进行香豆素、萜类及萜类内酯化合物、甾体化合物等成分检查。
(7)醉马芨芨草有毒生物碱降解研究
继续进行不同物理、化学和微生物方法对醉马芨芨草有毒生物碱降解研究。测定处理后的样品干物质、粗蛋白和粗脂肪等8项指标含量,目前已检测完毕,分析不同处理对其营养成分的影响,探讨变化趋势,为醉马芨芨草的有毒生物碱降解效果提供科学依据。
(8)项目总结及财务验收准备
     项目组各单位分别进行项目总结及财务内部审查。例如,新疆农业大学组织项目组成员,核对项目研究内容和考核指标从新疆草原主要毒害草调查、新疆草原主要毒害草生态毒理机制的研究、新疆草原主要毒害草综合防治技术研究、新疆草原主要毒害草防除示范基地的建立4个任务,整理项目执行以来所做的工作,对研究成果进行全面总结,并着手进行财务验收事宜。同时,完成本项目资助的校级大学生创新项目“醉马草青贮过程中主要微生物变化规律研究”的结题工作。并组织参与本项目研究的硕士研究生进行中期考核。
 

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